Хламидиоз Плотоядных

Содержание

Хламидиоз — это острая или хронически протекающая зоонозная болезнь собак, кошек, других животных и человека, характеризующаяся развитием кератоконъюнктивита, ринита, пневмонии и поражением мочеполовой системы. Хламидиозная инфекция широко распространена среди собак и кошек, лисиц и песцов. Это инфекционное заболевание, обусловленное внутриклеточными паразитами из рода Chlamydia, Субстратом их действия являются эпителиальные ткани и клетки иммунной системы животных

Эпизоотологические данные
Резервуар инфекции в природе — мелкие грызуны.

Хламидиоз наиболее часто поражает животных в возрасте от 5-и недель до 9-и месяцев.

Источником возбудителя инфекции являются больные животные и бактерионосители, а также животные с латентной формой болезни, которые выделяют возбудителя во внешнюю среду с истечениями из носовых полостей и глаз, а также при чихании и фырканьи, с мочой и фекалиями, со слюной и экссудатом генитальных путей.

Факторами передачи возбудителя служат инфицированный корм, вода, предметы ухода, шерсть, спецодежда. Заражение происходит алиментарным, контактным, половым и реже аэрогенным путями, а также внутриутробно.

Болезнь проявляется в виде спорадических случаев и эндемических вспышек. Строгой сезонности нет, но зато установлена стационарность инфекции.

Патогенез
Проникнув в организм, возбудитель размножается в эпителиальных клетках слизистых оболочек и макрофагах. Затем внедряется в кровь и заносится во внутренние органы, лимфоузлы, суставы и даже в головной мозг, где вызывает воспалительные процессы.

Клинические признаки
Инкубационный период продолжается 5-10 дней.
Заболевание протекает остро и хронически.

При остром течении болезни часто развивается конъюнктивит и ринит в начале серозный, а затем катарально-гнойный.

В начале заболевания отмечают легкую лихорадку, продолжающуюся несколько дней. Причем, животные сохраняют аппетит. Конъюнктивит продолжается от нескольких дней до нескольких месяцев и иногда принимает хроническое течение. В начале поражается один, а затем оба глаза.

Пневмония и диарея протекают субклинически. Достаточно часто регистрируются аборты и перитонит.

Патологоанатомические изменения. При вскрытии обнаруживают увеличение селезенки, пневмонию и перикардит. В мазках-отпечатках из органов — элементарные тельца хламидий.

Патологоанатомические исследования
Серозный, серозно-гнойный конъюнктивит, ринит.
Катаральная бронхопневмония.
Серозно-фибринозный перикардит.
Гиперплазия селезенки.
Зернистая дистрофия печени, почек и миокарда.

Диагностика
Диагноз ставится комплексно с учетом эпизоотологических данных, клинических признаков, результатов патологоанатомического вскрытия и лабораторных исследований.
В лабораторию направляют выделения из глаз и носовых полостей, пораженные внутренние органы и трупы мелких животных.

Дифференциальная диагностика
При постановке диагноза необходимо исключить чуму (инфекционная сыпь на коже, гисто: негнойный лимфоцитарный энцефалит), пастереллез (отеки подкожной клетчатки в области головы и шеи, крупозная пневмония, геморрагический диатез), герпесвирусную инфекцию (у кошек катарально-язвенный кератит), листериоз (гнойный менингоэнцефалит с микроабсцессами в головном мозгу, проводят бак. исследование).

Лечение
Назначаются антибиотики тетрациклинового ряда (Эритромицин, Тетрациклин), сумамед, юнидокс и др., нарушающие у паразитов синтез белка.

Для лечения слизистых глаз используется мазь, содержащая антибиотик (эритромициновая или тетрациклиновая), которую необходимо закладывать за нижнее веко глаза животного не менее 3 раз в день.

Профилактика
Профилактикой для кошек является вакцинация (вакцины: Мультифел, Пюревакс)

Болезнь проявляется в виде спорадических случаев и эндемических вспышек. Строгой сезонности нет, но зато установлена стационарность инфекции.

Хламидиоз плотоядных

Хламидиоз — острая или хронически протекающая зоонозная болезнь собак, кошек, других животных и человека, характеризующаяся развитием кератоконъюнктивита, ринита, пневмонии и поражением мочеполовой системы. Хламидиозная инфекция широко распространена среди собак и кошек, лисиц и песцов.

Резервуар инфекции в природе — мелкие грызуны.

Хламидиоз наиболее часто поражает животных в возрасте от 5-и недель до 9-и месяцев.

Патогенез. Проникнув в организм, возбудитель размножается в эпителиальных клетках слизистых оболочек и макрофагах. Затем внедряется в кровь и заносится во внутренние органы, лимфоузлы, суставы и даже в головной мозг, где вызывает воспалительные процессы.

Клинические признаки. Инкубационный период продолжается 5-10 дней. Заболевание протекает остро (8%) и хронически (20%).

При остром течении болезни часто развивается конъюнктивит (85, 4%) и ринит (88. 4%) в начале серозный, а затем катарально-гнойный.

Пневмония и диарея протекают субклинически. Достаточно часто регистрируются аборты и перитонит.

1. Серозный, серозно-гнойный конъюнктивит, ринит.
2. Катаральная бронхопневмония.
3. Серозно-фибринозный перикардит.
4. Гиперплазия селезенки.
5. Зернистая дистрофия печени, почек и миокарда.

Диагностика. Диагноз ставится комплексно с учетом эпизоотологических данных, клинических признаков, результатов патологоанатомического вскрытия и лабораторных исследований. Для чего в лабораторию направляют выделения из глаз и носовых полостей, пораженные внутренние органы и трупы мелких животных.

Дифференциальная диагностика. При постановке диагноза необходимо исключить чуму (инфекционная сыпь на коже, гисто: негнойный лимфоцитарный энцефалит), пастереллез (отеки подкожной клетчатки в области головы и шеи, крупозная пневмония, геморрагический диатез), герпесвирусную инфекцию (у кошек катарально-язвенный кератит), листериоз (гнойный менингоэнцефалит с микроабсцессами в головном мозгу, проводят бакисследование).

Резервуар инфекции в природе — мелкие грызуны.

Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему: Диагностика и профилактика хламидиоза домашних плотоядных животных

Оглавление диссертации Шамсутдинова, Нажия Вагизовна :: 2020 :: Казань

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1:1. Характеристика возбудителя.

1.1.1. Таксономическое положение хламидий.

1.1.2. Морфология и цикл развития хламидий

1.1.3. Химический состав хламидий

1.1.4. Антигенная структура и иммуногенные свойства хламидий

1.2. Лабораторная диагностика хламидиоза.

1.2.1. Выявление морфологических структур возбудителя в исследуемом материале

1.2.2. Выделение и культивирование хламидий •

1.2.3. Индикация и идентификация антигенов хламидий

1.2.4. Генодиагностика хламидиоза

1.2.5. Выявление противохламидийных антител

1.3. Специфическая профилактика хламидиоза.

1.4. Хламидиоз домашних плотоядных животных (собак и кошек).

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Эпизоотологическое обследование

2.2. Опытные животные „

2.3. Сыворотки и патологический материал

2.4. Индикация возбудителя в патологическом материале.

2.5. Серологические реакции

2.6. Штаммы хламидий

2.7. Получение хламидийного антигена для иммуноферментного анализа

2.8. Разработка инактивированной вакцины против хламидиозов плотоядных

2.9. Статистическая обработка результатов исследований

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Степень распространения хламидийных инфекций среди поголовья домашних плотоядных животных.

3.2. Разработка иммуноферментной тест-системы для выявления хламидийных антител.

3.2.1. Подбор метода получения хламидийного антигена

3.2.3. Конструирование иммуноферментной тест-системы для выявления хламидийных антител

3.2.4. Сравнительное изучение эффективности РСК и ИФА для ретроспективной диагностики хламидиоза домашних плотоядных

3.3. Серологический скрининг домашних плотоядных животных в отношении хламидийной инфекции.

3.4. Разработка специфического препарата для профилактики хламидиоза плотоядных животных.

3.4.1. Получение инактивированной эмульсионной вакцины против хламидиоза плотоядных животных

3.4.2. Изучение безвредности, антигенной активности и иммуногенности вакцинного препарата для профилактики хламидиоза плотоядных животных в лабораторных условиях

3.4.3. Иммуноморфологическая оценка вакцины против хламидиоза плотоядных животных (ВНИВИ)

3.4.4. Сравнительная оценка различных биопрепаратов для специфической профилактики хламидиоза домашних плотоядных

3.4.5. Использование инактивированной вакцины против хламидиоза плотоядных животных в ветеринарной практике

4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ

6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

Введение диссертации по теме «Ветеринарная эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология», Шамсутдинова, Нажия Вагизовна, автореферат

Актуальность темы. Хламидийные инфекции широко распространены среди всех видов млекопитающих животных и птиц. Заболевание наносит существенный экономический ущерб различным отраслям животноводства и птицеводства, вызывая гибель животных, патологию их воспроизводительных органов, аборты, рождение мертвого или нежизнеспособного приплода.

Больные животные часто становятся источником инфекции для работников сельского хозяйства и перерабатывающих производств, что приводит к возникновению эпидемических вспышек. Распространенность возбудителей хламидиозов в природе среди домашних и диких животных, а также птиц представляет постоянную угрозу спорадических заболеваний для людей, профессионально не занятых в сельском хозяйстве (12, 71, 101, 291).

В доступной литературе имеются единичные сообщения о хламидийной природе заболеваний у домашних собак и кошек (52, 53, 71, 72, 135). Тем не менее, многие вопросы эпизоотологии, этиологии, симптоматики, патогенеза, диагностики, лечения и-профилактики хламидиоза домашних плотоядных животных остаются нерешенными и требуют детального изучения.

Лабораторная диагностика хламидиоза включает обнаружение возбудителя в органах и тканях путем световой и люминесцентной микроскопии, выделение возбудителя на куриных эмбрионах и культурах клеток, выявление в сыворотках крови, больных и переболевших животных комплемент связывающих антител. Эти тест-системы имеют целый ряд недостатков: длительность получения ответа, низкая чувствительность и специфичность, субъективность оценки результатов исследования.

В последние годы для индикации и идентификации хламидий предложены современные иммунохимические и молекулярногенетические методы, такие как: иммуноферментный анализ, иммуноблотинг, гибридомные технологии, полимеразная цепная реакция и др. (8, 30, 34, 58, 76). Перечисленные методы обладают высокой чувствительностью, специфичностью, воспроизводимостью, возможностью одновременно исследовать большое число проб, простотой постановки и учета результатов, способностью выявлять межвидовые и меж-штаммовые различия хламидий. Исходя из этого, перспективным является совершенствование лабораторной диагностики хламидийных инфекций у домашних плотоядных с учетом достижений современной биотехнологии.

Приоритетным в профилактике и ликвидации хламидиозов сельскохозяйственных животных остается применение антимикробных препаратов и вакцин. Разработаны и внедрены в ветеринарную практику биопрепараты при хламидийных инфекциях крупного и мелкого рогатого скота, свиней и птиц (49, 96, 109, 117), разработана и апробирована в производственных условиях вакцина против хламидиоза пушных зверей (87).

Несмотря на это, вопросы специфической профилактики хламидиоза у домашних плотоядных до настоящего времени остаются открытыми. Кроме того, актуальным является разработка научно обоснованных мероприятий по диагностике, профилактике и ликвидации инфекционных болезней хламидийной природы у мелких домашних животных.

Цель и задачи исследований. Цель исследований — усовершенствовать средства диагностики и профилактики хламидиоза домашних плотоядных животных (собак и кошек).

В соответствии с целью работы были поставлены следующие задачи:

— провести комплекс исследований по выяснению встречаемости хламидиоза при различной патологии у домашних плотоядных животных;

— разработать тест-систему для серологической диагностики хламидиоза у собак и кошек иммуноферментным методом;

— разработать инактивированную вакцину против хламидиоза плотоядных животных.

Научная новизна. Разработан новый метод получения антигена из очищенной культуры хламидий.

Впервые сконструирована и апробирована в лабораторных и производственных условиях иммуноферментная тест-система для индикации в сыворотках крови домашних плотоядных животных (собак и кошек) противохламидийных антител.

С использованием разработанного набора диагностикумов проведен серологический скрининг спонтанно зараженных хламидиями мелких домашних животных.

Разработана инактивированная эмульсионная вакцина против хламидиоза плотоядных животных, которая успешно апробирована в ветеринарной практике.

Практическая ценность. Разработана иммуноферментная тест-система для ретроспективной диагностики хламидиоза у домашних плотоядных.

Установлена возможность использования указанной тест-системы для определения напряженности иммунитета у собак и кошек после вакцинации против хламидиоза.

Разработана, апробирована и успешно внедрена в ветеринарную практику вакцина против хламидиоза домашних плотоядных.

Результаты проведенных исследований вошли в следующие разработанные и внедренные в практику нормативно-технические документы:

— во «Временное наставление по применению вакцины против хламидиоза плотоядных животных (пушных зверей, собак и кошек) инактивированной эмульсионной (в порядке опыта)», утвержденное ГУВ Кабинета министров РТ 21 марта 2020 г.;

— во «Временную инструкцию по изготовлению и контролю иммунофермент-ной тест-системы для выявления хламидийных антител у собак и кошек», утвержденную ректором КГАВМ 18 марта 2020 г.;

— в «Технические условия на опытную партию иммуноферментных тестсистем для выявления хламидийных антител у собак и кошек», утвержденные ректором КГАВМ 18 марта 2020 г.;

— во «Временное наставление по применению иммуноферментной тест-системы для выявления хламидийных антител у собак и кошек», утвержденное ГУВ Кабмина РТ 18 марта 2020 г.

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены на:

— Ежегодных итоговых заседаниях ученых советов Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана (2020-2020 г.г.).

— Научно-практических конференциях по проблемам ветеринарии и зоотехнии (Казань, 2020, 2020 и 2020 г.г.).

— Международной научной конференции, посвященной 70-летию образования зооинженерного факультета (Казань, 2020 г.).

— Научно-практической конференции «Актуальные проблемы биологии и ветеринарной медицины мелких домашних животных» (Киров, 2020 и 2020).

— Научно-практической конференции «Актуальные вопросы ветеринарной медицины домашних животных» (Екатеринбург, 2020 и 2020 г.г.).

— Научно-практической конференции «Ветеринарная медицина. Современные проблемы и перспективы развития» (Саратов, 2020 г.).

— IX и X международных ветеринарных конгрессах (Москва, 2020 и 2020 г.г.).

Публикация результатов исследования. По теме диссертации опубликовано 14 научных работ. Разработаны нормативно-технические документы на биопрепараты: два наставления, одна инструкция и одни технические условия.

Основные положения диссертации, выдвигаемые для защиты:

— результаты клинико-эпизоотологических и лабораторных исследований поголовья домашних плотоядных в отношении хламидийных инфекций;

— оценка эффективности общепринятых, разработка и совершенствование методов ретроспективной диагностики хламидиозов собак и кошек;

— разработка инактивированной эмульсионной вакцины против хламидиоза 9 плотоядных животных.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 149 страницах компьютерного текста (текстовый редактор «Mikrosoft Word 2020», стиль «Times New Roman», размер шрифта 14 пт, интервал полуторный) и включает: введение, обзор литературы, материалы и методы исследований, результаты собственных исследований (4 главы), обсуждение результатов исследования, выводы, практические предложения и указатель литературы (всего 295 источника, в том числе 155 иностранных и 9 ссылок на сайты Internet). Диссертация иллюстрирована 9 таблицами и 14 рисунками. Прилагаются разработанные нормативно-технические и другие документы, подтверждающие результаты исследований, их научно-практическую ценность.

Заключение диссертационного исследования на тему «Диагностика и профилактика хламидиоза домашних плотоядных животных»

1. Клинико-эпизоотологическими и лабораторными исследованиями установлено значительное распространение у мелких домашних животных хла-мидийных инфекций:

— симптомы характерные для хламидийных инфекции встречаются у 5-20% от общего числа собак и кошек, владельцы которых обращаются к ветеринарным специалистам.

— в реакции связывания комплемента с хламидийным антигеном в диагностических титрах реагируют 13,2% сывороток крови, полученных от подозрительных по заболеванию хламидиозом домашних плотоядных.

— при исследовании методом люминесцентной микроскопии клинических материалов, полученных от подозрительных по заболеванию хламидиозом собак и кошек, в 62,5% случаях выявляется специфическое внутриклеточное свечение хламидийного антигена.

2. Комбинированное использование при диагностике хламидиоза у собак и кошек люминесцентной микроскопии (РИФ) и серологических тестов (РСК) позволяет выявлять на 33,3 % больше реагирующих животных.

3. Сконструированная иммуноферментная тест-система для выявления хламидийных антител у собак и кошек эффективна при подтверждении ранее установленного другими методами диагноза на хламидиоз у спонтанно больных собак и кошек, серологическом скрининге поголовья мелких домашних животных в отношении хламидиоза, а также оценке иммунитета у вакцинированных животных.

4. Анализ результатов исследования сывороток крови подозрительных по заболеванию собак и кошек иммунопероксидазным методом показал, что диагностический титр при индикации хламидийных антител в ИФА должен составлять 1:100 и выше.

5. При сравнительном исследовании сывороток крови, полученных от подозрительных по заболеванию хламидиозом домашних плотоядных, в РСК и ИФА с хламидийным антигеном в диагностических титрах реагируют соответственно 13,2% и 31,7%, что свидетельствует о высокой специфичности последней.

6. Серологическим скринингом поголовья собак и кошек в г. Казани выявлено 15,8% домашних плотоядных, в сыворотках крови которых циркулируют специфические хламидийные антитела.

7. Разработанная вакцина против хламидиоза плотоядных животных является безвредной, стерильной и иммуногенной при испытании в лабораторных условиях.

8. Однократная иммунизация собак и кошек вакциной против хламидиоза плотоядных животных в условиях ветеринарной клиники вызывает образование хламидийных антител, выявляемых в РСК и ИФА в титрах 1:10-1:40 и 1:100-1:400 соответственно, у 100% вакцинированных особей.

6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

На основании проведенных исследований внесены следующие практические предложения:

1. С целью предупреждения заболевания домашних плотоядных хламидиозом ветеринарные специалисты обязаны регистрировать все случаи абортов и мертворождений у самок, уретритов и орхитов у самцов, конъюнктивитов, а также гибели приплода в первые дни жизни и принимать все меры для установления причин, вызвавших эту патологию;

2. Руководители и ветеринарные специалисты клубов по разведению собак и кошек обязаны учитывать эпизоотическое состояние хозяйств, в которых заготавливаются корма животного происхождения для домашних плотоядных, а при необходимости принимать меры для исследования их лабораторными методами.

3. Недопустимо использование подозрительных по заболеванию животных для получения потомства до выяснения диагноза. Самцов, при спаривании л с которыми у самок наблюдаются аборты, мертворождения и рождение слабого нежизнеспособного молодняка, для дальнейшего разведения не допускаются и должны подвергаться лабораторным исследованиям на хламидиоз.

4. При диагностике заболевания у мелких домашних животных (собак и кошек) необходимо использовать сочетание серологических тестов и методов индикации антигенов хламидий в тканях;

5. Иммуноферментная тест-система для выявления хламидийных антител у собак и кошек предложена для промышленного изготовления (Временное наставление по применению иммуноферментной тест-системы для выявления хламидийных антител у собак и кошек, утверждено ГУВ Кабмина РТ 18 марта 2020 г.) и может быть использована в ветеринарной практике для подтверждении ранее установленного другими методами диагноза на хламидиоз у спон

106 танно больных собак и кошек, серологическом скрининге поголовья мелких домашних животных в отношении хламидиоза, а также оценке иммунитета у иммунизированных животных;

6. Для специфической профилактики заболевания рекомендуется прививать домашних плотоядных специфическими биопрепаратами. Вакцина против хламидиоза плотоядных животных (ВНИВИ) предложена для промышленного изготовления (Временное наставление по применению вакцины против хламидиоза плотоядных животных инактивированной эмульсионной, утверждено ГУВ Кабинета министров РТ 21 марта 2020 г.);

7. Следует вести разъяснительную работу среди владельцев домашних плотоядных об опасности данного заболевания для человека. Лица, ухаживающие за больными животными, а также ветеринарные специалисты, оказывающие гинекологическую и терапевтическую помощь, должны соблюдать меры личной профилактики.

Заканчивая работу, выражаю благодарность ректорату Казанской академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана и дирекции Республиканского Центра по профилактике и борьбе со СПИДом (г. Казань) за предоставленную возможность выполнения и оформления работы.

Приношу искреннюю признательность и благодарность моему научному руководителю кандидату биологических наук Валерию Валентиновичу ГЕРАСИМОВУ и научному консультанту профессору Рустаму Хамитовичу РАВИЛОВУ за повседневное руководство и помощь при работе над диссертационной темой.

Выражаю сердечную благодарность сотрудникам отдела культивирования и идентификации вирусов РЦГТБ СПИД, лаборатории контроля и индикации возбудителей вирусных и хламидийных инфекций в объектах ветеринарного надзора ВНИВИ, кафедры патологии мелких животных и оперативной хирургии и других подразделений КГАВМ, а также руководству и специалистам ветеринарных клиник и лабораторий за чуткое отношение и товарищескую помощь при выполнении экспериментальной части работы.

Известно, что домашние плотоядные нередко подвержены инфекционным заболеваниям, характеризующимся различными нарушениями течения беременности, рождением слабого нежизнеспособного молодняка, поражением мочеполовой сферы у самцов, конъюнктивитами и другими симптомами, этиология которых зачастую остается невыясненной. Исходя из этого, особого внимания заслуживает проблема установления природы, в т.ч. и хламидийной, этих патологий.

Среди поголовья домашних плотоядных города Казани нами проведено эпизоотологическое обследование с целью установления причин возникновения и закономерностей распространения хламидийных инфекций. Были выявлены потенциальные источники и совокупность факторов передачи возбудителей инфекции, а также контингент восприимчивых животных.

При разведочных серологических исследованиях собак и кошек установлена серопозитивность в РСК соответственно 13,9 и 12,8% животных, из числа подозрительных по заболеванию хламидиозом.

В результате лабораторных исследований клинического материала от этих животных методом люминесцентной микроскопии в 62,5% случаях в мазках-отпечатках РИФ было выявлено специфическое внутриклеточное свечение хламидийного антигена. Корреляция результатов РСК и РИФ составила 66,1%.

Разработана иммуноферментная тест-система для выявления хламидийных антител в сыворотках крови собак и кошек. Создан диагностический набор биопрепаратов.

Детальное описание разработанной методики нашло отражение в нормативно-технических документах: а) Временной инструкции по изготовлению и контролю иммунофермент-ной тест-системы для выявления хламидийных антител у собак и кошек; б) Технических условиях на иммуноферментную тест-систему для выявления хламидийных антител у собак и кошек (ТУ 9388-001-00493623-02);

88 в) Временном наставлении по применению иммуноферментной тест-системы для выявления хламидийных антител у собак и кошек (в порядке опыта).

Кроме того, нами испытана возможность использования этого набора препаратов для оценки поствакцинального иммунитета, а также серологического скрининга поголовья мелких домашних животных (собак и кошек) в отношении хламидийных инфекций.

Для специфической профилактики хламидиозов плотоядных животных разработана инактивированная эмульсионная вакцина. Изготовлена опытно-промышленная партия биопрепарата, которая успешно прошла лабораторные и производственные испытания. В производственных условиях вакцина использована для иммунизации собак и кошек, содержащихся в домашних условиях. Временное наставление по применению вакцины против хламидиоза плотоядных животных инактивированной эмульсионной, утверждено ГУВ Кабинета министров РТ 21 марта 2020 г.

Внедрение этих разработок в ветеринарную практику специалистами ветеринарных лечебниц позволяет успешно бороться с хламидиозами домашних собак и кошек.

4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ

В условиях загрязнения окружающей среды, повышения уровня фоновой радиации и высокой степени урбанизации перед человечеством возникла проблема иммунодефицита, который становится причиной снижения резистентности человека и животных к возбудителям инфекционных болезней. В настоящее время регистрируется целый ряд инфекционных болезней вирусной и бактериальной природы, которые в последние 20-30 лет получили значительное распространение среди людей и животных. Одним из таких заболеваний является хламидиоз.

Многие вопросы диагностики, профилактики и ликвидации хламидиозов сельскохозяйственных животных (крупного рогатого скота, овец, коз, свиней и лошадей) изучены достаточно хорошо, результаты этих исследований широко используются в ветеринарной практике. Однако в доступной литературе нами были найдены лишь единичные сообщения об этиологической роли хламидий в патологии мелких домашних животных (19, 52, 71, 72, 92, 135, 153, 182, 248).

Недостаточная изученность данного вопроса; значительный экономический ущерб, причиняемый инфекционными болезнями служебному собаководству и заводчикам собак и кошек; моральный ущерб, причиняемый владельцам при заболевании домашних питомцев; отсутствие или несовершенство методов диагностики, мер борьбы и профилактики хламидиоза явились основанием для изучения данного заболевания у домашних плотоядных.

В целях установления этиологической роли хламидий в патологии беременности самок, поражения мочеполовой сферы у самцов, в проявлениях кера-токонъюнктивитов, поражении центральной нервной системы и др., а также гибели молодняка в первые дни после рождения, нами среди поголовья домашних собак и кошек в городе Казани, были проведены эпизоотологические, клинические, серологические, патологоанатомические исследования; а также совершенствование методов диагностики и специфической профилактики хламидиозов.

При анализе эпизоотической ситуации учитывали условия содержания и кормления животных, результаты щенения самок и сохранности щенков, результаты экспертиз ветеринарных лабораторий, другие показатели и материалы. Проводились разведочные серологические исследования сывороток крови подозрительных по заболеванию хламидиозом мелких домашних животных.

В результате проведенной работы установлено, что причиной широкого распространения хламидиозов среди домашних плотоядных (собак и кошек) оказались: отсутствие эффективных средств диагностики, профилактики и борьбы с данной инфекцией; недостаточное информирование владельцев о возможности заболевания их питомцев хламидийными инфекциями; нарушение правил содержании и спаривании мелких домашних животных; бесконтрольное использование для их кормления продуктов убоя сельскохозяйственных животных и другие факторы.

По данным, полученным из разных источников, от 5 до 20% домашних плотоядных, владельцы которых обращаются к ветеринарным специалистам, имеют клинические признаки, характерные для хламидийных инфекций, и этиология их остается не выясненной. По нашему мнению и по мнению ряда авторов (71, 72, 74, 182), хламидии могут играть значительную этиологическую роль при различной патологии у домашних собак и кошек.

Лабораторная диагностика хламидиоза представлена вполне тривиальным набором методов.

Цитологический метод, основанный на визуальном исследовании прокрашенного мазка под большим увеличением светового микроскопа (х900-1500), являясь одним из наиболее старых, тем не менее, до сих пор не утратил своего значения. Достоинством цитологических методов является дешевизна и возможность одновременного выявления других инфекций; недостатком — низкая чувствительность (по разным оценкам 10-40%). Поэтому упомянутые методы используются в ветеринарной практике, в основном, как дополнительные или мониторинговые.

Культуральный метод основан на способности хламидий к размножению на перевиваемых линиях клеток млекопитающих или клеток желточных мешочков куриных эмбрионов. Культуральный метод считается «золотым стандартом» с условной чувствительностью — 100% (в действительности — не более 80%). Чувствительность остальных методов принято выражать в процентах по отношению к культуральному методу. К недостаткам метода следует отнести его трудоемкость и длительность, а в случае с мелкими домашними животными также отсутствие специальных культур клеток.

Для совершенствования диагностики хламидиоза в последние годы предложены иммуноферментные и иммунофлюоресцентные методы выявления антигена в клиническом материале. Первый из них не получил широкого распространения в ветеринарной практике из-за высокого процента ложноположи-тельных и ложноотрицательных результатов исследования. Второй в настоящее время является одним из наиболее перспективных экспресс методов диагностики заболевания. Несмотря на высокую чувствительность и специфичность, метод иммунофлуоресценции не достаточно широко используется в ветеринарных лабораториях при диагностике хламидиозов. Это было, главным образом, связано с отсутствием специальных диагностических наборов, оборудования и специалистов, а также дискредитацией метода некомпетентными лицами, использующими при исследованиях флуоресцирующие антитела с низкими показателями красящего титра и неадекватно оценивающими результаты исследований.

Следует отметить, что медицинские специалисты сравнительно давно, широко и с успехом используют РИФ для ранней диагностики хламидийных инфекций человека (119).

Недостатками указанных методов является, необходимость специального оборудования и реактивов, а также высокой квалификации исследователей.

Использование серологических методов для выявления хламидийных антител при диагностике хламидиоза у человека и животных не позволяет с достаточной степенью уверенности говорить о наличии или отсутствие данного заболевания, т.к. эти тесты не позволяют отличить наличие инфекции в настоящее время, перенесенное заболевание и вакцинный иммунитет. Кроме того, специфика паразитирования хламидий в организме хозяина обуславливает не всегда адекватную заболеванию ответную иммунную реакцию зараженного организма. В связи с этим, в настоящее время в медицинской практике имму-ноферментный метод выявления хламидийных антител используют главным образом для подтверждения диагноза установленного другими методами (119).

Общепринятым тестом для ретроспективной диагностики хламидиозов, применяемым во всех странах мира, является реакция связывания комплемента (81, 128, 130, 140 ,235, 236, 284 и другие). У нас в стране разработаны «Методические указания по лабораторной диагностике хламидийных инфекций у животных», утвержденных Департаментом ветеринарии Минсельхозпрода РФ 30 июня 2020 г., где также рекомендуется применять РСК в качестве серологического метода диагностики и при этом связывание комплемента сывороткой крови в разведении 1:5 считают сомнительной реакцией, а в разведении 1:10 и более принято в качестве диагностического титра.

Для постановки реакции в нашей работе мы использовали групповидос-пецифический антиген, изготовленный по методу Боровика Р.В. с соавт. (9) в условиях лаборатории вирусологии ВНИВИ, согласно «Временных инструкций по изготовлению, контролю набора антигенов и сывороток для серологической диагностики хламидиозов сельскохозяйственных животных и набора флуоресцирующих иммуноглобулинов и контрольных сывороток для диагностики хламидиозов сельскохозяйственных животных», утвержденных ГУВ Госагропро-ма СССР 30 ноября 1987 года.

При исследовании в РСК 287 сывороток, полученных от подозрительных по заболеванию хламидиозом домашних плотоядных в диагностических титрах реагировали 38 (13,2%) животных из числа исследованных, число реагирующих колебалось в пределах 4,4-19,0% по разным группам. Эти данные подтверждают результаты исследования сывороток крови сельскохозяйственных животных (22, 130), пушных зверей и домашних плотоядных (53, 71, 92, 87, 88).

От подозрительных по заболеванию хламидиозом собак и кошек получали клинический материал. В РИФ было исследовано 48 проб, из них 20 были взяты у собак и 28 у кошек. В 30 (62,5%) случаях методом люминесцентной микроскопии в мазках-отпечатках было выявлено специфическое внутриклеточное свечение хламидийного антигена (12 у собак и 18 у кошек). В РИФ возбудитель чаще всего обнаруживался в мазках-отпечатках с конъюнктивы и со-скобах с уретры.

Обобщенные результаты исследования подозрительных по хламидиозу домашних плотоядных животных (собак и кошек) в РСК и РИФ показали, что эти методы дополняют друг друга при индикации заболевания у мелких домашних животных. Об этом говорит высокое значение суммы показателей «РСК-/ РИФ+», «РСК±/ РИФ-» и «РСК+/ РИФ-«, которая составляет 33,3%. Иными словами в эту группу входят животные, у которых хламидиоз установлен одним из тестов (РСК или РИФ), причем в первом случае мы обнаруживаем антитела, а во втором антиген. Таким образом, используя комбинацию двух разных методов диагностики, нам удается выявить большее число реагирующих животных. Сочетания ретроспективных тестов и методов индикации антигена в тканях широко используется в гуманитарной медицине (119).

Следует также отметить, что для кошек сумма вышеуказанных показателей почти в два раза выше (39,3%), чем для собак (20,0%). Это, скорее всего, связано с тем, что у первых заболевание чаще проявляется конъюнктивитами, при которых циркулирующие в крови антитела образуются в небольшом количестве (общепринятые методы серологической диагностики их не обнаруживают), в тоже время генитальная форма хламидиоза у кошек, хотя и сопровождается образованием антител в диагностических титрах, не всегда протекает типично, поэтому хламидийный антиген при патологиях органов размножения малодоступен для индикации люминесцентным методом.

Учитывая высокую чувствительность, специфичность и экспрессность иммунопероксидазных методов по сравнению с РСК при выявлении антител в сыворотках крови, нами была проделана работа по разработке иммуноферментной тест-системы для ретроспективной диагностики хламидиоза у мелких домашних животных (собак и кошек). К началу наших исследований в доступной литературе имелись сведения об использовании подобных тест-систем для выявления хламидийных антител у человека и животных (15, 33, 65, 68, 103, 105, 121, 128, 129, 264, 265, 279 и другие).

Нами были испытаны различные способы получения антигенов для модельных опытов и разные варианты выполнения ИФА. При выполнении твердофазного варианта ИФА важным моментом, предшествующим самой реакции, является подготовка антигена. Именно его качеством определяется чувствительность и специфичность конкретной тест-системы, поэтому для сравнения в ИФА нами были получены и испытаны лизатные антигены хламидий штамма «Ростиново-70». В качестве детергентов мы использовали: 0,1%-ный раствор додецилсульфата натрия, 1%-ный раствор дезоксихолата натрия, 1%-ный раствор твина-80, 1%-ный раствор тритона-ХЮО, также нами была разработана оригинальная схема очистки и концентрации лизированных антигенов хламидий.

Наиболее специфичным оказался антиген, полученный из фракции собранной в 35%-ной сахарозе ступенчатого градиента, которая подвергалась обработке 1%-ным дезоксихолатом натрия. Коэффициент его специфичности в ИФА при концентрации 6 мкг/мл составлял для сывороток кошек 10,6, собак -11,8.

Полученный антиген не реагировал с гетерологичными сыворотками, содержащими антитела против микоплазам и вирусов чумы плотоядных.

Хламидийные сыворотки получали на клинически здоровых серонега-тивных беспородных собаках и кошках. В качестве антигена для иммунизации мы использовали смесь хламидий штаммов «КС-93» и «КК-99». Интервалы между введениями антигенов составляли 14-15 дней. Все полученные иммунные хламидийные сыворотки сводили в серию с таким расчетом, чтобы специфическая активность приготовленной серии сыворотки была в РСК не ниже, чем 1:40. Контрольные (отрицательные) сыворотки получали от серонегативных интактных собак и кошек. Их обработку проводили аналогично схеме получения положительных сывороток. Контрольные (отрицательные) сыворотки также объединяли в одну серию.

В качестве конъюгата мы использовали белок А, меченный пероксидазой хрена (НПО «Пептоскрин-2», г. Электросталь). Титр конъюгата определяли путем «шахматного» титрования специфического антигена и положительных хламидийных сывороток.

Кроме того, нами был подобран регламента постановки реакции. При этом мы учитывали, что иммуноферментная тест-система относится к экспрессным методам диагностики, т.е. экспозиция реагентов должна быть наименьшей. Кроме того, чрезмерное увеличение времени инкубации планшете с реагентами в термостате часто приводит к снижению коэффициента специфичности тест-системы. В тоже время мы учитывали, что короткая экспозиция приводит к появлению ложноотрицательных результатов. Оптимальным временем экспозиции сывороток оказалась инкубация планшета в термостате в течение 60 минут, конъюгата — 40 минут. Полученные нами результаты согласуются с данными полученными исследователями, которые также разрабатывали иммуноферментные тест-системы для выявления специфических антител (6, 7).

В результате исследований нами разработан набор для диагностики хламидиоза собак и кошек в ИФА путем выявления антител, включающий: сорбированный специфическим хламидийным антигеном планшет для иммунологических реакций; положительные и отрицательные контрольные образцы сывороток крови собак и кошек; конъюгат; концентрат фосфатно-солевого раствора с твином; цитратный буферный раствор с перекисью водорода; хромоген и стоп-реагент.

ИФА с использованием этой тест-системы выполняется по непрямому методу:

— планшет или необходимое количество стрипов разборного планшета один раз промывают раствором ФСР-Т;

— контрольные и исследуемые образцы разводят в растворе ФСР-Т 1:100 и вносят по 100 мкл в лунку (контрольные образцы вносят каждый в 2 лунки);

— в одну лунку не вносят ни контрольные, ни исследуемые сыворотки (контроль конъюгата);

— планшет или стрипы разборного планшета помещают во влажную камеру и инкубируют 60 минут при 37°С;

— лунки 4 раза промывают раствором ФСР-Т, остатки содержимого лунок удаляют легким постукиванием по 4-5 слоям фильтровальной бумаги;

— в каждую лунку планшета или стрипа разборного планшета вносят по 100 .> мкл рабочего раствора конъюгата, после чего планшет или стрипы помещают во влажную камеру и инкубируют 40 минут при температуре 37°С;

— лунки 5 раз промывают раствором ФСР-Т, остатки содержимого лунок удаляют легким постукиванием по 4-5 слоям фильтровальной бумаги;

— в каждую лунку планшета или стрипа вносят по 100 мкл субстратного раствора и инкубируют при комнатной температуре в темном месте в течение 10-15 минут;

— реакцию останавливают добавлением в лунки по 50 мкл стоп-реагента и проводят учет результатов ИФА.

Результаты ИФА мы регистрировали с помощью спектрофотометра Mul-tiskan, измеряя оптическую плотность (ОП) смеси реагентов в лунках при длине волны 492 нм. «0» (бланк) устанавливали по воздуху. Результат подлежал учету, если среднее значение ОП отрицательных контрблей (ОП ср. К-) не превышало 0,2 оптические единицы (о.е.), а среднее значение ОП положительных контролей (ОП ср. К+) составляло не менее 0,8 о.е. Положительными считали образцы исследуемых сывороток, ОП которых превышала критическое значение ОП (ОП крит.), которое рассчитывали по формуле: ОП крит.= ОП ср. К- + 0,2.

Сконструированная нами тест-система имеет достаточно высокий коэффициент специфичности (6,5-7,5), что позволяет регистрировать результаты анализа не только инструментально, но и визуально по интенсивности окрашивания цветной реакции ферментзависимой метки с субстратом. Положительными считали образцы, интенсивность окрашивания которых в лунках с исследуемой сывороткой отчетливо отличалась от таковой в отрицательном контроле. Интенсивность окрашивания положительного контроля при этом должна была быть достаточно выраженной.

При определении критериев оценки результатов исследования сывороток крови подозрительных по заболеванию хламидиозом домашних плотоядных о, иммунопероксидазным методом мы учитывали обобщенные данные собственных исследований, а также анализировали сообщения по данному вопросу в доступной литературе. Нашими предыдущими (87) и настоящими исследованиями установлено, что для экспериментально и спонтанно зараженных хла-мидиями собак и кошек диагностическим титром является разведение сыворотки 1:100. Такой критерий оценки позволяет в наибольшей степени избежать получения как лоноположительных, так и ложноотрицательные результатов ИФА. Многие исследователи также указывают, что ИФА на порядок более чувствителен, чем РСК (1, 36, 126, 127, 128, 130, 203, 270). Исходя из этих данных, диагностический титр иммунопероксидазного метода при индикации хламидийных антител должен составлять 1:100, т.к. в РСК положительным принят титр сыворотки 1:10.

В ИФА нами были исследованы 287 проб сывороток крови мелких домашних животных, из них 91 проба (31,7%) реагировала в диагностических титрах (1:100 и выше).

Сравнительное изучении эффективности использования РСК и ИФА для ретроспективной диагностики хламидиоза у собак и кошек показало, что совпадение результатов двух тестов отмечается в 80,1% случаев. Значение показателя «РСК отрицательно / ИФА положительно», равное 19,2% (при исследовании сывороток собак — 17,6%, кошек — 20,1%), говорит о более высокой чувствительности последней. При этом в ИФА отдельные полевые сыворотки реагировали в титре 1:1600, что говорит о высокой чувствительности теста при диагностике хламидиоза у собак и кошек. Представленные данные находятся в соответствии с результатами других исследователей (65, 229, 543, 569 и другие), которые также отмечали высокую чувствительность, специфичность и воспроизводимость ИФА, а также целый ряд преимуществ метода перед РСК (3, 130, 203, 270, 279 и другие).

Таким образом, нашими исследованиями установлена возможность применения реакции связывания комплемента и иммуноферментного анализа для ретроспективной серологической диагностики хламидиозов у домашних собак и кошек. При этом установлено, что использование в качестве диагностического теста ИФА более эффективно.

Разработанный и испытанный нами набор препаратов для выявления хламидийных антител в ИФА обеспечивал индикацию и идентификацию заболевания у спонтанно инфицированных домашних плотоядных. Кроме того, мы предлагаем использовать этот метод для оценки эффективности иммунитета при вакцинации против хламидиоза и серологического скрининга поголовья мелких домашних животных (собак и кошек).

В настоящее время не возможно представить борьбу с хламидийными инфекциями животных без применения иммуногенных препаратов. Получением вакцин активно занималась целая группа исследователей (47, 96, 109, 110, 111, 112, 117, 131, 152, 215,216, 223, 225, 239 и многие другие).

В нашей стране созданы и внедрены в ветеринарную практику вакцины против хламидиозов крупного и мелкого рогатого скота, свиней. В последние годы разработаны вакцины против хламидиозов пушных зверей, собак и кошек, однако их качество не всегда удовлетворяет требованиям ветеринарных специалистов.

Нами была проделана работа по разработке биопрепарата для профилактики хламидиоза плотоядных животных. Для этого была использована технология получения инактивированной эмульсионной вакцины, разработанная Хамадеевым Р.Х. с соавт. (ТУ 10-07-253-91).

Были подобраны: иммуногенные штаммы хламидий, выделенные от пушных зверей, собак и кошек; режимы их инактивации; эмульгаторы, дающие удобную для применения препарата консистенцию и не обладающие повышенной реактогенностью в организме. Проведены лабораторные и производственные испытания вакцины против хламидийных инфекций плотоядных животных.

Учитывая достаточную иммуногенность штаммов хламидий «БЛ-84», «ПП-87», «КС-93» и «КК-99» (соответственно возбудителей хламидиозов лисиц, песцов, собак и кошек), они были использованы при изготовлении вакцинного препарата.

По методу, описанному Хамадеевым Р.Х. с соавт. (108) получена биомасса вышеуказанных штаммов. Разработана схема очистки и концентрации элементарных телец хламидий путем дифференциального и на градиенте сахарозы центрифугирования. Получены гомогенная и инактивированная взвесь хламидий с высоким содержанием специфического антигена, пригодная для приготовления препарата.

На основе двух эмульгаторов: легкого минерального «вакцинного» масла, изготовленного на Ангарском нефтехимическом заводе (43% в конечном продукте) и безводного ланолина (7% в конечном продукте) получена вакцина, которая имела стабильную при длительном хранении сметанообразную консистенцию и при температуре 30-37°С легко набиралась в шприц и вводилась животным подкожно и внутримышечно. Применение указанного масляного адъ-юванта повышает иммуногенность вакцин против хламидиоза (109).

В условиях лаборатории было установлено, что полученная вакцина безвредна и стерильна; при подкожном и внутримышечном введении обеспечивает у 100% морских свинок формирование иммунитета.

При вакцинации белых мышей препарат защищал от внутрибрюшинного заражения штаммом «250» 83,3-86,7% лабораторных животных. Иммунизированных белых мышей заражали штаммом «250», т.к. его летальность для белых мышей при внутрибрюшинной контаминации составляет 100%, что облегчает учет иммуногенных свойств вакцинного препарата. Использование морских свинок и белых мышей для оценки соответственно антигенных свойств и им-муногенности противохламидийных биопрепаратов предлагали и другие исследователи (109, 206, 215).

Кроме того, антигенность вакцины против хламидиоза плотоядных животных изучалась в условиях лаборатории на собаках и кошках путем анализа сероконверсии у подопытных животных через 2 и 4 недели после введения биопрепарата. Было установлено, что однократная вакцинация вызывает у домашних плотоядных накопление в сыворотках крови хламидийных антител, выявляемых в РСК и ИФА. Через 4 недели после инъекции титры антител в РСК и ИФА составили при внутримышечном введении 1:10-1:80 и 1:1001:1600 соответственно у 100% животных. В этом плане наши результаты согласуются с данными других исследователей (3, 178). Аналогичная картина наблюдалась при изучении сероконверсии после вакцинации против лептоспиро-за (4).

Для оценки иммуногенности вакцинных препаратов, в том числе и против хламидиоза, наравне с серологическими методами и экспериментальным заражением, используют и гистологические исследования иммунокомпетент-ных органов привитых животных.

Проведенные исследования свидетельствовали, что микроморфологические изменения в органах животных разных видов не имели резких отличий.

При микроскопических исследованиях гистологических срезов, приготовленных из органов морских свинок, собак и кошек, иммунизированных инактивированной эмульсионной вакциной против хламидиоза плотоядных животных (ВНИВИ), были обнаружены потоморфологические изменения, которые свидетельствували, что данный биопрепарат оказывает достаточно выраженное иммунологическое действие на организм, что подтверждается выраженными лимфоидно-гиперпластическими процессами в иммунокомпетентных органах.

Кроме того, мы отмечаем, что вакцина обладает и умеренными реакто-генными свойствами, которые вполне допустимы и не приводят к развитию необратимых процессов в органах и тканях иммунизированных животных.

С целью сравнительного изучения эффективности отечественных биопрепаратов против хламидиоза кошек и собак в условиях лаборатории нами была проведена иммунизация котят 3-4 месячного возраста и щенят 2,5-4 месячного отечественных противохламидийными биопрепаратами для мелких домашних животных: ассоцированной вакциной «Мультифел-4» против пан-лейкопении, калицивироза, гервесвироза и хламидиоза кошек (НПО «Нарвак»), вакциной против хламидиоза пушных зверей, собак и кошек «Хламикон» (ЗАО «Ветзвероцентр») и вакциной против хламидиоза плотоядных животных (ВНИВИ).

Нами установлено, что титры хламидийных антител у подопытных котят после введения вакцины против хламидиоза плотоядных животных (ВНИВИ) были несколько выше, чем после применения «Мультифел-4», однако эти показатели отличались недостоверно (Р>0,1). У групп котят и щенков, вакцинированных вакциной «Хламикон» уровень специфических антител был достоверно

102 ниже такового после иммунизации вакциной против хламидиоза плотоядных животных (ВНИВИ).

При испытании опытной серии вакцины в условиях ветеринарной клиники мы провели иммунизацию собак и кошек, содержащихся в домашних условиях. Было вакцинировано 24 собаки и 32 кошки. Препарат вводили однократно внутримышечно в дозе 0,5 мл с массой тела до 10 кг и однократно внутримышечно в дозе 1 мл с массой тела свыше 10 кг. Исследование сывороток крови иммунизированных животных спустя 30 дней после вакцинации показало высокую иммуногенность биопрепарата.

В заключение следует подчеркнуть, что проведенные нами исследования позволили: установить распространение хламидийных инфекций среди домашних плотоядных животных; усовершенствовать средства и методы диагностики хламидиоза у собак и кошек; разработать вакцину для профилактики заболевания у плотоядных животных и доказать её эффективность.

Нами была проделана работа по разработке биопрепарата для профилактики хламидиоза плотоядных животных. Для этого была использована технология получения инактивированной эмульсионной вакцины, разработанная Хамадеевым Р.Х. с соавт. (ТУ 10-07-253-91).

Хламидиоз Плотоядных

ВСЕРОССИЙСКИЙтУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ВЕТЕРИНАРНЫЙ ИНСТИТУТ

На правах рукописи

РАВИЛОВ РУСТАМ ХАМЕТОВИЧ

ХЛАМИДИОЗ ПЛОТОЯДНЫХ животных

(этиология, диагностика, профилактика и меры борьбы)

16.00.03. — ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология и иммунология

на соискание ученой степени доктора ветеринарных наук

доктор ветеринарных наук, профессор, заслуженный деятель науки РТ АЛИМОВ А.М.

доктор ветеринарных наук, старший научный сотрудник, заслуженный деятель науки РТ ХАМАДЕЕВ Р.Х.

1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ . 16

1.1. Таксономическое положение хламидий. 18

1.2. Биологические свойства хламидий. 21

1.2.1. Морфология и цикл развития. 21

1.2.2. Химический состав. 22

1.2.3. Антигенная структура. 24

1.2.4. Токсичность. 26

1.2.5. Интерфероногенность и интерфероночувствительность. 28

1.2.6. Устойчивость хламидий при хранении и воздействии физико-химических факторов. 28

1.3. Лабораторная диагностика хламидиозов . 32

1.3.1. Выявление морфологических структур хламидий. 33

1.3.2. Индикация и идентификация антигенов хламидий в патологическом материале. 34

1.3.3. Выделение и культивирование возбудителя. 36

1.3.4. Серологические реакции. . 37

1.3.5. Использование моноклональных антител в диагностике хламидийных инфекций. 44

1.3.6. Иммунохимическая идентификация хламидийных антигенов. 46

1.3.7. Генодиагностика хламидиозов. 48

1.4. Меры борьбы с хламидиозами животных и их специфическая профилактика. 53

1.5. Биологические особенности некоторых клеточных пушных зверей

и домашних плотоядных. 57

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ. 62

2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ. 62

2.1. Штаммы хламидий. 62

2.2. Сыворотки и патологический материал. 62

2.3. Подопытные животные и куриные эмбрионы. 63

2.4. Эпизоотологическое обследование. 63

2.5. Выделение и идентификация возбудителей. 64

2.6. Изучение биологических свойств. 65

2.6.1. Морфологические свойства. . 65

2.6.2. Патогенность. 66

2.6.3. Токсичность. 68

2.6.4. Антигенные свойства. . 68

2.6.5. Иммуногенность. ••••• 69

2.7. Серологические реакции. 69

2.8. Изучение иммунохимического состава антигенов хламидий. 73

2.9. Молекулярно-генетические методы индикации и идентификации возбудителей. 73

2.10. Экспериментальное воспроизведение хламидиозов клеточных и домашних плотоядных. 75

2.11. Изучение возможности обезвреживания хламидий in ovo и in vivo.. 77

2.12. Разработка инактивированной вакцины против хламидиозов пушных зверей. 78

2.13. Статистическая обработка результатов исследований. 80

3 РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ. 82

3.1. Анализ эпизоотического состояния по хламидиозу звероводческих хозяйств и поголовья домашних плотоядных животных. 82

3.2. Лабораторная диагностика хламидиозов пушных зверей и домашних плотоядных. 100

3.2.1. Серологические исследования. 100

3.2,2.Вы деление возбудителей хламидиозов от клеточных и домашних

плотоядных на куриных эмбрионах. 102

3.3. Биологические свойства изолятов хламидий. 106

3.3.1 Изучение морфологии хламидий. . 106

3.3.2 Патогенность изучаемых штаммов хламидий для куриных эмбрионов и лабораторных животных. 113

3.3.3 Токсичность штаммов хламидий, выделенных от клеточных и домашних плотоядных. 121

3.3.4 Антигенные свойства возбудителей хламидийных инфекций плотоядных. 122

3.3.5 Иммунохимический анализ антигенов хламидий, выделенных от плотоядных. 123

3.3.6 Иммуногенные свойства хламидий, вызывающих заболевания у плотоядных. 131

3.4 Усовершенствование лабораторных методов индикации и идентификации возбудителей хламидийных инфекций сельскохозяйственных, клеточных и домашних животных. 132

3.4.1 Изучение возможности использования иммуноферментного метода для ретроспективной диагностики хламидиозов плотоядных. 133

3.4.2 Разработка набора препаратов для выявления хламидийных антигенов методом ИФА. 140

3.4.3 Получение и изучение возможности использования моноклональных антител для диагностики хламидиозов. 149

3.4.4 Выделение ДНК хламидий и разработка полимеразной цепной реакции для индикации и идентификации возбудителей хламидийных инфекций. 156

3.5 Экспериментальное воспроизведение хламидийных инфекций у плотоядных. 165

3.6 Изучение возможности обезвреживания хламидий in ovo и in vivo. 185

3.6.1. Определение активности антимикробных препаратов в отношении хламидий, выделенных от плотоядных. 186

3.6.2. Изучение эффективности химиопрофилактики и терапии хламидиозов пушных зверей и домашних плотоядных. 190

3.7. Разработка инактивированной полиштаммовой эмульсионной вакцины против хламидиозов пушных зверей. 193

3.7.1. Разработка технологии получения вакцинного препарата для профилактики хламидиозов пушных зверей. 193

3.7.2. Изучение безвредности, антигенной активности и иммуногенности инактивированной эмульсионной вакцины против хламидиозов пушных зверей в лабораторных условиях. 196

3.7.3. Производственные испытания полиштаммовой инактивированной вакцины против хламидиозов пушных зверей. 201

3.8. Организация диагностических, профилактических и противоэпизоотических мероприятий при хламидийных инфекциях клеточных и домашних плотоядных. 204

3.8.1. Мероприятия по диагностике, профилактике и ликвидации хламидиоза пушных зверей. 205

3.8.2. Мероприятия по диагностике, профилактике и лечению хламидиоза домашних плотоядных. 208

4 ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ. 215

6 ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ. 241

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ. 243

АЖ — асцитная жидкость

АТФ — аденозин трифосфат

ГТФ — гуанозин трифосфат

ДНК — дезоксирибонуклеиновая кислота

ДСН — додецилсульфат натрия

ЖОКЭ — желточная оболочка куриных эмбрионов

ИФА — иммуноферментный анализ

кД- кило дальтон

КЭ — куриные эмбрионы

МКАТ — моноклональные антитела

М.м. — молекулярная масса

MTIA — мясо-петттонный агар

МПБ — мясо-пептонный бульон

МППБ — мясо-пептонный печеночный бульон

НТД — нормативно-техническая документация

ОП — оптическая плотность

ПААГ — полиакриламидный гель

ПЦР — полимеразная цепная реакция

РА — реакция агглютинации

РДСК — реакция длительного связывания комплемента

РИА — радиоммунный анализ

РИФ — реакция иммунофлуоресценции

РН — реакция нейтрализации

4 РНГА — реакция непрямой гемагглютинации

РНК — рибонкулеиновая кислота

РНСК — реакция непрямого связывания комплемента

РП — реакция преципитации

РСК — реакция связывания комплемента

РЭМА — реакция энзиммеченных антител

ТУ — технические условия

ФБ — фосфатный буфер

ФББР — фосфатно-буферный физиологический раствор

ХАО — хорионаллантоисная оболочка

ЭДТА — этилендиаминтетрауксусная кислота

ЭЛД50 — инфекционный титр, определяемый на куриных эмбрионах

Актуальность темы. Хламидиозы — инфекционные заболевания человека, птиц и животных. Паразитируя в организме, хламидии вызывают широкий спектр клинических проявлений болезни, таких как: аборты, пневмонии, энтериты, артриты, конъюнктивиты, уретриты, орхиты, энцефалиты и т.д., которые приводят к гибели животных, снижению их продуктивности и племенной ценности, недополучению приплода, тем самым наносят значительный экономический ущерб животноводству и представляют угрозу здоровью людей.

В настоящее время хламидийные инфекции описаны и изучены у большинства сельскохозяйственных животных: крупного и мелкого рогатого скота, свиней, лошадей и птиц (87,101,123,168, 233, 267, 423, 444 и другие).

История звероводства в нашей стране насчитывает несколько десятилетий. За сравнительно короткий срок накоплен большой опыт разведения пушных зверей в специализированных хозяйствах, где содержатся десятки тысяч животных. Разработаны эффективные методы содержания и кормления зверей с ценным мехом в неволе. Особое значение в благополучном состоянии клеточного звероводства имеет совершенствование методов диагностики, профилактики и лечения различных инфекционных болезней пушных зверей. В этом плане проводится большой объем исследований, однако многие вопросы, касающиеся изучения причин, вызывающих у пушных зверей различные нарушения процесса плодоношения и другую патологию изучены недостаточно. Поголовье пушных зверей нередко подвержено различным инфекционным заболеваниям, этиология которых остается невыясненной. Отдельные авторы (36, 92, 151) высказывали предположения, что патологические процессы у пушных зверей могут быть вызваны микроорганизмами рода хламидий. Кроме того, в доступной литературе имеются единичные сообщения о хламидийной природе заболеваний у

домашнш собак и кощек (92, 127, 128, 248» 284, 494), Тем не менее» многие вопросы’ эпизоотологии, этиологии, симптоматики, патогенеза, диагностики, лечения и профилактики хламидиозов клеточных и домашних плотоядных остаются нерешенными и требуют детального изучения.

Рутинные методы лабораторной диагностики хламидиозов включают обнаружение возбудителя в органах и тканях путем световой и люминесцентной микроскопии, выделение возбудителя на развивающихся куриных эмбрионах, выявление в сыворотках крови больных и переболевших животных комплементсвязывающих антител. Эти тест-системы имеют целый ряд недостатков (длительность получения ответа, низкая чувствительность и специфичность, субъективность оценки результатов исследования). В последние годы для индикации и идентификации хламидий предложены современные иммунохимические и молекулярно-генетические методы, такие как: иммуноферментный анализ, иммуноблотинг, гибридомные технологии, полимеразная цепная реакция и другие (16, 54, 64, 102, 134, 218, 229, 279, 281, 309, 373, 391, 396, 411, 412, 459, 529, 582 и другие). Перечисленные методы обладают высокой чувствительностью и специфичностью, воспроизводимостью и возможностью одновременно исследовать большое число проб, простотой постановки и учета результатов, способностью выявлять межвидовые и межштаммовые различия хламидий. Исходя из этого, перспективным является совершенствование лабораторной диагностики хламидийных инфекций животных, в том числе пушных зверей и домашних плотоядных с учетом достижений современной биотехнологии.

Приоритетным в профилактике и ликвидации хламидиозов сельскохозяйственных животных остается применение антимикробных препаратов, к которым чувствительны хламидии, и вакцин. Разработаны и внедрены в ветеринарную практику протективные биопрепараты при хламидийных инфекциях крупного и мелкого рогатого скота, свиней и птиц

(87, 164, 193, 203, 233, 426, 446, 478 и другие). Однако, вопросы химиотерапии и специфической профилактики при хламидиозах пушных зверей и домашних плотоядных до настоящего времени остаются открытыми. Кроме того, актуальным является разработка научно-обоснованных мероприятий по диагностике, профилактике и ликвидации инфекционных болезней плотоядных хламидийной природы.

Цель и задачи исследований. Цель исследований — комплексное изучение этиологической роли хламидий, усовершенствование методов диагностики, разработка средств профилактики и противоэпизоотических мероприятий при хламидиозах клеточных и домашних плотоядных.

В соответствии с целью работы были поставлены следующие задачи:

— провести комплекс исследований по выяснению этиологической роли хламидий при различной патологии у пушных зверей и домашних плотоядных и изучить биологические свойства выделенных изолятов;

— изучить пригодность диагностических тестов, применяемых при хламидиозах сельскохозяйственных животных, для диагностики хламидийных инфекций плотоядных;

— разработать современные тест-системы для диагностики хламидиозов;

— разработать инактивированную вакцину против хламидиозов пушных зверей;

— разработать научно-обоснованные рекомендации по диагностике, профилактике и ликвидации хламидийных инфекций клеточных и домашних плотоядных.

Научная новизна. Впервые комплексными (эпизоотологическими, клиническими, патологоанатомическими, серологическими,

бактериологическими и иммунобиологическими) исследованиями доказана этиологическая роль хламидий в патологии плотоядных животных. Выделены и идентифицированы оригинальные штаммы хламидий от лисиц, песцов и собак,

которые по биологическим характеристикам являются типичными представителями рода Chlamydia и обладают выраженными патогенными и антигенными свойствами, подтвержденными лабораторными испытаниями и при экспериментальном воспроизведении хламидийных инфекций у пушных зверей и домашних плотоядных. Штаммы хламидий «БЛ-84» и «ПП-87», соответственно возбудители хламидиоза лисиц и песцов, признаны изобретениями (авторские свидетельства №№ 1667869 и 1667870) и использованы для изготовления инактивированной эмульсионной вакцины против хламидиозов пушных зверей.

Разработаны, усовершенствованы и апробированы в лабораторных и производственных условиях современные методы (ИФА, РИФ, иммуноблотинг и ПЦР) индикации и идентификации возбудителей хламидийных инфекций пушных зверей и домашних плотоядных животных на основе применения поли-и моноклональных антител, а также препаратов ДНК хламидий. Один из гибридомных клонов, секретирующий моноклональные антитела к хламидийиым антигенам, признан изобретением (авторское свидетельство № 1639060) и депонирован в «Банке клеточных культур» института цитологии АН СССР.

Впервые разработана система мероприятий по профилактике и ликвидации хламидиозов клеточных и домашних плотоядных с использованием антимикробных препаратов широкого спектра действия и полиштаммовой инактивированной эмульсионной вакцины, которая успешно апробирована в производственных условиях.

Практическая ценность. Результаты исследований позволили в�

3.6.2. Изучение эффективности химиопрофилактики и терапии хламидиозов пушных зверей и домашних плотоядных. 190

Хламидиоз плотоядных

Хламидиоз — зооантропонозное инфекционное заболевание, которое проявляется конъюнктивитами, пневмониями, ринитами и поражениями мочеполовой сферы.

Подвержены заболеванию все плотоядные животные. Наиболее часто встречается среди собак, кошек, песцов и лисиц.

Возбудитель болезни принадлежит к роду Chlamydia. Внутриклеточный, грамотрицательный, кокковый, ДНК и РНК- содержащий микроорганизм являющийся постоянным обитателем слизистых оболочек млекопитающих и человека, хотя некоторые источники утверждают, что только 50% животных поражены микроорганизмом.

Хламидия не проявляет активности в организме до того момента, пока резистентность его высока, в вирулентность микроорганизма малая. Начиная своё развитие внутри клетки, возбудитель за 72 часа может размножиться до тысячи.

Во внешней среде не стоек. При температуре 18-21 ᵒС жизнеспособен до 2-х суток, при кипячении погибает моментально. В воде возбудитель живёт до 15 дней в птичьем помёте до 4-х месяцев. Растворы формальдегида (2%), фенола (3%) обеззараживают за 2,5-3 часа.

У Chl. Psittaci излюбленное место локализации слизистые оболочки верхних дыхательных путей, конъюнктива.

Chl. Abortus выбрала для жизнедеятельности мочеполовую систему, как самок, так и самцов.

Эпизоотология

Переносить возбудителя могут животные и птицы, резервуаром в природе являются мелкие грызуны.

Заболевание поражает животных всех возрастных групп. Более старые животные болеют латентно.

Во внешнюю среду возбудителя выделяют бактерионосители и больные животные с истечениями из глаз, носа, мочой, слюной, фекальными массами, выделениями из гениталий. Собаки заражаются от человека, КРС и МРС, лошадей, свиней, котов и морских свинок.

Инфицированные корма, предметы ухода, спец. одежда служат путём передачи, а заражение возможно алиментарное, половым путём, воздушно-капельным, внутриутробным.

Сезонности при заболевании не наблюдается, но проявление наиболее частое в период ослабления иммунитета. Инфекция стационарна. Проявляется как эндемические так и спорадические вспышки.

Попадая в организм животного, возбудитель проникает на слизистые оболочки и начинает жизнедеятельность в эпителиальных клетках. Внедрившись в кровь разносится по всем органам, лимфоузлам, суставам, проникает в головной мозг.

Инкубационный период не определён. Возбудитель годами может жить в организме и не проявить активности, а может показать клинику на 5-й день.

При остром течении болезнь проявляется конъюнктивитами, ринитами от серозного до гнойно-катарального характера. Возможна перемежающаяся лихорадка. Заболевание протекает без изменения поведения и аппетита животного.

Переходя в хроническую форму, может поражаться как один, так и оба глаза. Из глаз выделяются истечения, но таковых может и не быть, а слизь будет скапливаться во внутренних углах.

Иногда возбудитель переходит на орган слуха и развиваются все признаки отита. Ушные раковины покрываются корками, животные испытывают дискомфорт, трясут головой, чешут уши. При размножении секундарной микрофлоры при проведении гигиенических процедур можно чётко ощутить зловонный запах.

Животные могут кашлять, чихать, фыркать при этом температура повышается редко. При захвате лёгких температура до 41ᵒС.

Проблемы в мочеполовой сфере самок проявляются абортами, которые проходят во второй половине щённости, и рождением мёртвых щенят. Если щенение прошло благополучно, то возможна гибель потомства в первые дни. Нередки бесплодия.

У самцов орхиты протекают хронически, иногда вызывают бесплодия.

В редких случаях хламидии вызывают опухание суставов и хромоту. Животное больше лежит, движение неуверенное, походка шаткая. При этом возбудитель захватывает несколько суставов, вызывая хламидиозный полиартрит.

Диагностика основана на клинических признаках, эпизоотологической картине, результатах лабораторной экспертизы.

В лабораторию направляется материал взятый из глаз, носовых отверстий, абортированные плоды, выделения из влагалища или препуция. Постановка реакций РСК, ИФА, РДСК, позволяет точно диагностировать заболевание.

Дифференцировать заболевание нужно от чумы плотоядных, пастереллёза, герпес вирусной инфекции кошек, листериоза.

Терапевтические мероприятия основываются на применении антибиотиков тетрациклинового ряда. Некоторые виды хламидий устойчивы к тем или иным антибиотикам , поэтому целесообразно провести лабораторный посев с выявлением чувствительности микрофлоры к антибиотикам.

При конъюнктивитах тетрациклиновая мазь закладывается за третье веко или в ушную раковину. Курс лечения 6-7 дней.

Перорально применяют тетрациклин, эритромицин в течение недели. Из макролидов можно использовать тилозин-50, внутримышечно три дня подряд. Хорошим эффектом обладает энрофлоксацин.

Для повышения клеточного иммунитета применяют иммуноактивные препараты (тимоген, спленин, циклоферон).

Профилактика

Для профилактической вакцинации кошек применяют поликомпанентный препарат Purevax RCPCh (Франция) и Мультифел-4 (Россия) с 2-х месячного возраста, ежегодно.

Для собак, кошек, пушных зверей применим ХламиКон (Россия). Иммунитет наступает через 2-3 недели и держится на протяжении года. Животным проводят специфическую профилактику с 3-х месячного возраста.

Все виды обследования, вакцинации и лечения Вашего питомца, в том числе экстренная помощь и госпитализацию Вашего питомца.

КРУГЛОСУТОЧНО:
+7 495 532 89 00
(многоканальный)
WatsApp / Viber
+7 925 584 75 71

Токсокароз — зоонозное заболевание, вызванное паразитированием круглых червей и характеризующееся…

Саркома — новообразование, которое характеризуется инфильтративным ростом клеток соединительной…

Фавус (парша) — заболевание грибковой природы, характеризующееся поражениями кожных покровов,…

Травмы головного мозга — патологическое состояние животного, проявившееся в результате механических…

Лишай — собирательное понятие заболеваний наружного покрова тела животного вызванного микроскопическими…

Тепловой удар и солнечный — острое расстройство функций центральной нервной системы в результате…

Тонзиллит — воспалительный процесс, проходящий в нёбных миндалинах, лимфоидных образованиях…

Туляремия — инфекционная болезнь бактериальной природы. Заболеванию подвержены сельскохозяйственные…

Хориоптоз — инвазионное заболевание вызываемое клещами-кожеедами рода Chorioptes. Заболеванию…

Чума крупного рогатого скота — вирусное, высоко контагиозное заболевание, имеющее острое течение…

Блефарит — заболевание воспалительного характера затрагивающее края век. Подвержены болезни…

Синовит — воспалительный процесс проходящий в синовиальной мембране выстилающей капсулу сустава.…

КРУГЛОСУТОЧНО:
+7 495 532 89 00
(многоканальный)
WatsApp / Viber
+7 925 584 75 71

Хламидиоз у кошек разрушает иммунную систему больных питомцев и выводит из строя функции внутренних…

Лишай — собирательное понятие заболеваний наружного покрова тела животного вызванного микроскопическими…